شرح تحليل عد الخلايا شبكية Reticulocytes Count Retics.

بسم الله الرحمن الرحيم

شرح تحليل عد الخلايا شبكية Reticulocytes Count Retics .

يسحب هذا التحليل على انبوبة Edta  الخاصة بتحليل CBC.

 طريقة عمل التحليل :-

* نشتغل اولا تحليل هيموجلوبين HB  لو النتيجة 6 او اقل نضع 200 ميكرون من الدم على 100 ميكرون محلول فى التيوب .

* نضع العينة فى الحضانه لمدة نصف ساعة .

* نفرد فيلم دم على شريحه زجاج باستخدام 100 ميكرون من العينة التى بالحضانه ونتركها حتى تجف .

* نضع نقطة زيت (50 ميكرون) فى منتصف الشريحه الزجاج .

* نفحص الشريحة تحت الميكروسكوب باستخدام العدسة

 الزيتية (oil) .

* نقسم (Retics / RBC) ثم نضرب فى 100 .

مثال :- Retics 10 و RBC 300 تكون المعادلة (10/300)*100 = 3.3 

** فى حالة ان نتيجة HB أعلى من 6 .

نضع 100 ميكرون من الدم على 100 ميكرون من المحلول وباقى الخطوات ثابتة .

شكل خلية الريتكس .

 ملحوظة :- 

فى حالة الانيميا العالية تكون Retics أعلى من الطبيعى بمعنى اخر عندما تكون HB قليلة تكون Retics عالية .

ما هى الخليه الشبكيه؟

طريقة تصنيع كرات الدم الجديدة (Erythropoiesis) و التى تتم فى نخاع العظام .

بشكل يومى تبدأ بخليه أوليه تسمى (Pronormoblast) وهى خليه تحتوى على نواة. وتنقسم تلك الخليه  ويحدث لها (Differentiation) فتتحول إلى خلية أخري.

 ثم إلى خلية أخرى وهكذا حتى نصل إلى كرة الدم الحمراء الجاهزه للخروج الى الدم (Erythrocyte).

تفقد تلك الخلايا النواة خلال مراحل التصنيع وباقي عضيات الخليه .

حتى تصل الى كرة الدم الحمراء (Mature). 

والتى لا تحتوى على نواة أو عضيات بل يحتل مساحتها بالكامل جزيئات الهيموجلوبين.

 الخليه التى تسبق (Erythrocyte) مباشره فى التصنيع .

هى خلية أيضا لا تحتوى على نواة ولكن بها بقايا من (Endoplasmic Reticulum). بما عليها من الربيوسومات .

و لهذا تسمى الخليه الشبكيه أو (Reticulocyte) .

 تخرج بعض الخلايا الشبكيه الى الدم بصورة طبيعية‘ مع (Erythrocyte) وتمثل تقريبا نسبه من 0.5 الى 2.5% من عدد كرات الدم الحمراء الكلي. 

وفى خلال يوم من خروجها للدم تفقد بقايا الشبكه الاندوبلازميه و تتحول إلى 
(Mature Erythrocyte).

 ونلاحظ هنا أنه لا يمكن التفريق بين كرة الدم والخليه الشبكيه فى فيلم الدم العادى المصبوغ بصبغه ليشمان .

ما الهدف من هذا التحليل؟

التحليل ده بيطلب بشكل روتينى فى حالات (Normocytic Anemia).

 و حالات (Macrocytic Anemia). لمحاوله التفريق بين انواع الانيميا و تشخيص الحاله بشكل صحيح .

بمعنى أنه لو عندى حاله أنيميا أيا كانت (Mild Or Moderate Or Sever ).

السؤال هنا ما هى إستجابه  (Bone Marrow) أو نخاع العظام لهذه الانيميا؟

هل يستجيب بتصنيع كرات دم حمراء أكثر لتعويض النقص الموجود؟

أم لا يقوم بتصنيع أكثر لكرات الدم الحمراء؟

 فى الحالتين كرات الدم الحمراء قليله وبالتالي مقدرش افرق من خلالها بين الموقفين (فى تصنيع ام لا).

انما لو عرفت أعد الخلايا الشبكيه  وعرفت نسبتها فى الدم يبقى أقدر أحكم على شغل  (Bone Marrow) .

بمعنى إنى لو لقيت نسبه الخلايا الشبكيه عالى فى وجود أنيميا .

 يبقى النخاع بيشتغل كويس و بيصنع  و بيستجيب للانيميا بزياده التصنيع.

 و لكن الخلايا اللى بتصنع بتتكسر لاى سبب كان وبالتالى فى الحاله دى يبقي الارجح إن المريض عنده (Hemolytic Anemia) .

على العكس لو لقيت إن نسبه الخلايا الشبكيه طبيعي فى وجود أنيميا .

 يبقى ده مؤشر على إن سبب الانيميا نفسها ربما تكون مشكله فى النخاع .

زى مثلا (Aplastic Anemia) و (Megaloplastic Anemia)

 فى إستخدام إضافى للتحليل وهو تقييم كفاءه علاج أنيميا نقص الحديد‘ و أنيميا نقص فيتامين ب 12‘ أو حمض الفوليك . 
حيث أن إرتفاع نسبه الخلايا الشبكيه‘ بعد العلاج يعد مؤشر مهم ‘على الاستجابه للعلاج  وذيادة إنتاج (Bone Marrow).

سحب العينه لاجراء التحليل.

العينه المطلوبه للتحليل هى عينه مسحوبه على ايديتا كما سبق وقلنا . 

ونتيجه لحدوث (In Vitro Maturation ) للخلايا فيجب عمل التحليل فى اسرع وقت ممكن (خلال 6 ساعات تقريبا) .

من الاخطاء الكارثيه  إنك تسيب العينه لتاني يوم لو مش هتشتغلها عندك فى المعمل  وهتبعتها لاب تو لاب.

الصبغه المستخدمة .

الصبغه المستخدمه هنا تقوم بصباغه (Ribosomal RNA) بلون أزرق .

و بالتالي يسهل تمييز الخلايا المحتويه على بقايا الشبكه الاندوبلازميه.

ومن أشهر الصبغات المستخدمه صبغتى (New Methylene Blue) 

و(Brilliant Cresyl Blue) .

طبعا مفيش عدد معين للنقاط الزرقاء ‘ اللى هتظهر داخل الخليه  لكن بشكل عام بقايا الشبكه الاندوبلازميه بيقل كل ما كانت الخليه More Mature .

تصحيح النتيجه .

لاحظت إن النتيجه عباره عن نسبه مئويه نفترض أن نسبه الخلايا الشبكيه  فى مريض أنيميا .

(هيموجلوبين 6 و هيماتوكريت 19) طالعه 8 %  .

كده نقدر نقول ان النخاع مستجيب بشكل كبير بدليل نسبه الخلايا الشبكيه العاليه

لكن فى الحقيقه الموقف مش كده خالص .

لان فى مشكله كبيره فى طريقه حساب النتيجه للخلايا الشبكيه.

و هى إن النتيجه عباره عن  نسبه الخلايا الشبكيه الى خلايا الدم الحمراء كلها.

فلو (RBCs) قليله هتزيد النتيجه  وهتطلع النسبه عاليه بشكل خاطئ .

(Reticulocyte Count Is Misleading)

طيب إيه الحل ؟

إننا نعمل تصحيح للنتيجه بربطها بدرجه الانيميا كالاتى:-

Corrected reticulocyte = Reticulocyte count X 
(Patient HCT / Normal HCT)

أو

Corrected reticulocyte = Reticulocyte count X 
(Patient Hb / Normal Hb)

لو عملنا التصحيح باستخدام الهيموجلوبين هتطلع النتيجه 4 % .

وبالتالي الارتفاع مش كبير زى ما كان بيوحى بيه النتيجه قبل تصحيحها.

إذن يجب تصحيح نتيجه تحليل (Reticulocyte) دائما فى حالات الانيميا.

 خاصه  Moderate و  Severe.

و لكن رغم التصحيح اللى عملناه ده ما زال لسه فى نسبة خطأ .

لسه النتيجه متقدرش تقول معبره 100% عن الموقف .

إيه السبب؟

Reticulocyte production index

 الجزئيه دى عاوزه تخيل و فهم و هحاول ابسطها بقدر الامكان.

احنا اتفقنا إن الخلايا الشبكيه بيحصل لها Maturation  وتصل لمرحله Erythrocyte فى خلال يوم من خروجها للدم .

لكن كل ما كانت الانيميا More Sever  كلما طلع النخاع خلايا شبكيه Less Mature. و بالتالي تحتاج أكثر من يوم واحد لاكتمال التحول إلى Erythrocyte .

و بيسموها (Shift Reticulocytes) .

إذن فى الحاله دى و احنا بنعد الخلايا الشبكيه على الفيلم  فاحنا فعليا بنعد الخلايا المنتجه النهارده  و كذلك الخلايا Less Mature اللى تم انتاجها أمس أو أول أمس.

إذن النتيجه اللى معايا دى مش معبره عن نشاط النخاع النهارده فقط  و لكن معبره عن نشاط اكثر من يوم.

إذن النتيجه دى أعلى من الحقيقه .

(Erroneously Overestimation Of Production)

طيب أحل المشكله دى إزاى ؟

الحل إنى أحسب حاجه أسمها Reticulocyte Production Index .

و ده يعتبر أفضل حاجه معبره عن نشاط النخاع فعليا  أو بمعنى أخر ده بيدي أفضل إنطباع عن (Rate Of RBC Production).

وده بيتحسب بقسمه (Corrected Reticulocyte) على (Maturation Factor).

 Factor ده الابحاث حسبته وهو عباره عن عدد الايام المطلوبه من الخليه الشبكيه لكى تصل الى مرحله Erythrocyte إعتمادا على نسبه HCT.

لو الهيماتوكريت (36-45) تبقي الخليه محتاجه (1) يوم لاكتمال النمو.

لو الهيماتوكريت (26-35) تبقي الخليه محتاجه (1.5) يوم لاكتمال النمو.

لو الهيماتوكريت (16-25) تبقي الخليه محتاجه (2) يوم لاكتمال النمو.

لو الهيماتوكريت (15 and below) تبقي الخليه محتاجه (2.5) يوم لاكتمال النمو.

لو طبقنا الكلام ده على المثال عندنا يبقي هنقسم الخلايا الشبكيه المصححه على 2 فتطلع ال RPI بيساوى 2 % .

و الرنج اللى تقدر تشتغل عليه الابحاث وضحته كالاتى:

Reticulocytosis Defined As Reticulocyte Index >3% .

Reticulocytopenia Defined As Reticulocyte Index <1% .

لو فى أى أسئلة ياريت تكتبوها فى الكومنتات و إن شاء الله هرد عليها لو فى حد محتاج أى توضيح للشرح .